Assassins Creed II bringt den Kern des Spielgefühls des ersten Teils zurück, der diesen so erfolgreich gemacht hat und erweitert das Spiel um neue Möglichkeiten, die die Spieler überraschen und fordern werden. Assassins Creed II erzählt eine epische Geschichte über Familie, Rache und Verschwörung. Schauplatz ist das Italien der Renaissance, eine Epoche, die Meilensteine der Kunst hervorbrachte, aber auch Schattenseiten voller Korruption und Habgier beinhaltete. Ezio freundet sich mit Leonardo da Vinci an, bekommt es mit den mächtigsten Familien in Florenz zu tun und wandelt durch die Kanäle Venedigs, wo er alles lernt, um ein Meisterassassinen zu werden.